طراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری

زمینه و هدف: هاری (rabies) یک آنسفالیت حاد است که سالانه سبب مرگ بیش از 60.000 انسان در جهان می شود. تنها راه نجات بیماران استفاده ی به موقع از واکسن های کارآمد است. هدف از این مطالعه معرفی یک سیستم بیانی یوکاریوتی جدید به منظور بیان ژن نوکلئوپروتیین (n) ویروس هاری می باشد. این سیستم جهت ارزیابی و ساخت واکسن ضد هاری به کار می رود. روش بررسی: توالی کامل ژن n سویه pv ویروس هاری به روش reverse transcriptase polymerase chain reaction (rt-pcr) تکثیر و در وکتور pcdna3.1(+) کلون شد. پس از هضم آنزیمی ژن از وکتور خارج و تعیین توالی شد. لکن به دلیل وجود موتانت در توالی آن، ژن مذکور به صورت وکتور نوترکیب pgh/n خریداری شد. pgh/n تکثیر و پس از هضم آنزیمی آن، ژن n مجدد در وکتور بیانی pcdna3.1(+) کلون و کلونینگ تایید شد. وکتور نوترکیب (+)/n pcdna3.1 به سلول های bsr کشت داده شده منتقل و بیان پروتیین n با روش آنتی بادی فلورسنت (fat) بررسی و تایید شد. یافته ها: تعیین توالی ژن تکثیر شده با rt-pcr وجود جهش در ژن را مشخص نمود. هضم آنزیمی و خارج شدن ژن n از وکتور pgh/n خریداری شده و وکتور نوترکیب (+)/n pcdna3.1 کلونینگ ژن n و نتایج الکتروفورز تکثیر ژن نوکلئوپروتیین را تایید کرد. کلونینگ مجدد ژن n در وکتور بیانی pcdna3.1(+) با روش هضم آنزیمی و کنترل سریع (quick check) نیز تایید و بیان پروتیین n در سلول های bsr با استفاده از پادتن اختصاصی و میکروسکوپ فلورسنت مشاهده شد. نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد پروتیین n ویروس هاری سویه pv، در سیستم بیانی یوکاریوتی pcdna3.1(+) طراحی شده کلون شده و می تواند بیان شود.